· poliakrilamidagel mesti oleh monomer akrilamida, bahan permulaan pempolimeran, pemangkin, dan kanan campuran garam dan penimbal bersama.
· akrilamidadan BIS (N, N '- methylene double acrylamide) ialah matriks gel bentuk monomer.
· ammonium persulfate memulakan proses pempolimeran pelekat. Perumusan gam memerlukan 10% larutan ammonium persulfat yang disediakan di dalam air. Kebanyakan maklumat menunjukkan keperluan untuk penggunaan aktif. Walau bagaimanapun, penyelesaian 10% boleh diletakkan pada 4 ℃ selama beberapa minggu tanpa kehilangan aktiviti yang ketara. Buat sehingga 10 ml dan buang apabila gam gagal beragregat.
Petua: Peratusan daripadaakrilamidadalam penjujukan gam dan gam protein tidak sama. Jika menggunakan akrilamida prabuatan: larutan BIS, pastikan anda mendapatkan botol yang betul.
· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) ialah pemangkin, dalam botol coklat, diletakkan di dalam peti sejuk. Tambah sejurus sebelum menuang gam.
· Elektroforesis poliakrilamida yang digunakan dalam elektroforesis hendaklah dicuci sebelum dan selepas setiap kali. Selepas elektroforesis, basuh dengan berus lembut dan kain dalam air sabun panas, bilas dengan air suling dan biarkan kering.
· kelembapan dan habuk boleh menyebabkan dengan polimer berongga. Sebelum elektroforesis, bersihkan plat kaca dengan pembersih kaca dan lap dengan berus lembut. Basuh dengan air suling dan keringkan dengan teliti dengan lap kertas. Bilas dengan 70% etanol sebelum mengelap dengan kertas membantu membersihkan dan mempercepatkan pengeringan. Tambah sampel akrilamida berturut-turut: BIS, air, larutan penimbal, ammonium persulfat, TEMED. Goncang sebati dan tuangkan segera.
Ia tidak perlu menyahgas polyacrylamide sebelum pempolimeran. (Akrilamida digunakan untuk diletakkan dalam vakum untuk mengeluarkan buih kerana oksigen menghalang pempolimeran.)
Petua sampel titik gam mendatar.
· letakkan sekeping kertas hitam di dalam kotak bawah, latar belakang hitam untuk membuat beberapa lubang sampel untuk melihat dengan lebih jelas.
· tangki gam berisi penimbal, tepat di atas koloid.
· jika di tepi mempunyai cahaya, hidupkan lampu, biarkan cahaya bersinar koloid. Lukiskan sampel ke dalam pipet.
· menggunakan peranti paip automatik.
· dalam 10-200 mu 1 titik bergerak cecair boleh digunakan dalam kebanyakan titik pada sampel. Untuk lubang sampel yang sangat kecil (kurang daripada 10μ1), kepala pipet panjang yang digunakan untuk gam penjujukan adalah lebih mudah.
· Pemipetan hanya direndam dalam sampel, menyedut cecair yang bergerak perlahan. Sampel mungkin kelihatan melekit dengan gliserin, dan pengepaman pantas boleh menarik gelembung udara ke dalam kepala pipet.
· sampel selepas menyedut kepala paip, akan menggerakkan kepala bendalir perlahan-lahan pada tepi paip atau kertas lap menghisap kepala cecair di luar titisan. Berhati-hati untuk tidak menghisap sampel.
Letakkan sampel ke dalam lubang sampel
· alat paip untuk mengekalkan sedikit tekanan, membuat sampel sedikit bergerak limpahan kepala cecair.
· kepala paip dimasukkan ke dalam penimbal, lebih tinggi sedikit daripada lubang tempat, mengekalkan tekanan positif. Hujung pipet boleh dimasukkan ke dalam lubang kecil.
· perlahan-lahan dan tetap sampel keluar. Hujung pipet diletakkan di atas lubang sampel titik, dan sampel akan tenggelam ke dalam lubang. Biarkan sampel tenggelam untuk mengisi lubang sampel dan bukannya menolak masuk.
· sebaik titisan terakhir sampel dengan kepala cecair, cecair akan bergerak ke kaki kedua, perlahan-lahan menaikkan pergerakan cecair, keluar dari penimbal
Bagaimana untuk melakukan pensampelan gam menegak?
· lubang sampel titik gam menegak terbentuk di antara dua kepingan kaca. Dalam gam yang sangat nipis, kepala pipet tidak boleh dimasukkan di antara dua plat kaca. Perhatikan gliserin! Letakkan kepala pipet di atas lubang sampel dan sampel akan tenggelam ke dalam lubang.
· titik sampel sebelum, pastikan untuk meletakkan titik menegak polipropilena asil gel sampel lubang dibilas bersih. Basuh akrilamida yang tidak dipolimerkan dan air yang mungkin muncul di bahagian bawah lubang sampel. Air boleh menjadikan lubang sampel lebih kecil. Gunakan picagari 25ml atau 50ml dan jarum 18-tolok. Tuangkan penimbal elektroforesis dan siram lubang sampel dengan berhati-hati.
· sukar untuk melihat lubang sampel, tetapi pada masa yang sama, selebihnya mudah. Sekiranya terdapat lebihan lubang, penimbal sampel boleh diuji dengan bromofenol biru.
Masa siaran: Mac-31-2023