· PolyacrylamideGel mesti oleh monomer acrylamide, bahan permulaan pempolimeran, pemangkin, dan hak campuran garam dan penampan bersama -sama.
· acrylamidedan bis (n, n '- methylene double acrylamide) adalah matriks gel bentuk monomer.
· Ammonium persulfate memulakan proses pempolimeran pelekat. Perumusan gam memerlukan 10% larutan ammonium persulfat yang disediakan di dalam air. Kebanyakan maklumat menunjukkan keperluan untuk kegunaan aktif. Walau bagaimanapun, penyelesaian 10% boleh diletakkan pada 4 ℃ selama beberapa minggu tanpa kehilangan aktiviti yang ketara. Buat sehingga 10 ml dan buang apabila gam gagal agregat.
Petua: PeratusanacrylamideDalam penjujukan gam dan gam protein tidak sama. Jika menggunakan premade acrylamide: penyelesaian bis, pastikan untuk mendapatkan botol yang betul.
· Temed (N, N, N ', N'- Tetramethyl ethylenediamine) adalah pemangkin, dalam botol coklat, diletakkan di dalam peti sejuk. Tambah sebelum menuangkan gam.
· Elektroforesis polyacrylamide yang digunakan kaca dalam elektroforesis perlu dibasuh sebelum dan selepas setiap masa. Selepas elektroforesis, basuh dengan berus lembut dan kain dalam air sabun panas, bilas dengan air suling dan berdiri kering.
· Kelembapan dan habuk boleh menyebabkan dengan polimer berongga. Sebelum elektroforesis, bersihkan plat kaca dengan pembersih kaca dan lap dengan berus lembut. Basuh dengan air suling dan kering dengan teliti dengan lap kertas. Membilas dengan 70% etanol sebelum menyapu dengan kertas membantu membersihkan dan mempercepatkan pengeringan. Tambah sampel acrylamide berturut -turut: BIS, air, penyelesaian penampan, ammonium persulfate, TEMED. Goncang dengan baik dan tuangkan dengan segera.
Ia tidak perlu untuk degass polyacrylamide sebelum pempolimeran. (Acrylamide digunakan untuk diletakkan dalam vakum untuk mengeluarkan gelembung kerana oksigen menghalang pempolimeran.)
Petua sampel titik gam mendatar.
· Letakkan sekeping kertas hitam di dalam kotak bawah, latar belakang hitam untuk membuat beberapa lubang sampel untuk melihat lebih jelas.
· Penampan tangki gam, hanya di atas koloid.
· Jika tepi mempunyai cahaya, hidupkan lampu, biarkan cahaya bersinar koloid. Lukis sampel ke dalam pipet.
· Menggunakan peranti pipet automatik.
· Dalam 10-200 mu 1 titik bergerak cecair boleh digunakan dalam kebanyakan mata pada sampel. Untuk lubang sampel yang sangat kecil (kurang daripada 10μ1), kepala pipet panjang yang digunakan untuk gam penjujukan lebih mudah.
· Pipet hanya direndam dalam sampel, menghirup cecair perlahan -lahan bergerak. Sampel mungkin kelihatan melekit dengan gliserin, dan pam cepat boleh menarik gelembung udara ke kepala pipet.
· Sampel Selepas menghirup kepala pipet, akan menggerakkan kepala cecair perlahan -lahan di pinggir paip atau mengelap kertas menghisap kepala cecair di luar titisan. Berhati -hatilah untuk tidak menghisap sampel.
Letakkan sampel ke dalam lubang sampel
· Peranti pipet untuk mengekalkan sedikit tekanan, membuat sampel sedikit bergerak kepala cecair limpahan.
· Kepala pipet dimasukkan ke dalam penampan, sedikit lebih tinggi daripada lubang tempat, mengekalkan tekanan positif. Hujung pipet boleh dimasukkan ke dalam lubang kecil.
· Perlahan -lahan dan mantap sampel keluar. Hujung pipet diletakkan di atas lubang sampel titik, dan sampel akan tenggelam ke dalam lubang. Biarkan sinki sampel mengisi lubang sampel dan bukannya menolak.
· Setelah penurunan sampel terakhir dengan kepala cecair, cecair akan bergerak ke kaki kedua, perlahan -lahan menaikkan langkah cecair, keluar dari penampan
Bagaimana cara membuat persampelan gam menegak?
· Lubang sampel titik gam menegak terbentuk di antara dua keping kaca. Dalam gam yang sangat nipis, kepala pipet tidak dapat dimasukkan di antara dua plat kaca. Tonton gliserin! Letakkan kepala pipet di atas lubang sampel dan sampel akan tenggelam ke dalam lubang.
· Sampel titik sebelum ini, pastikan untuk meletakkan titik menegak lubang sampel gel polipropilena acyl dibilas bersih. Basuh acrylamide yang tidak dipolimer dan air yang mungkin muncul di bahagian bawah lubang sampel. Air boleh membuat lubang sampel jauh lebih kecil. Gunakan jarum suntikan 25ml atau 50ml dan jarum 18-gauge. Tuangkan dalam penampan elektroforesis dan berhati -hati siram lubang sampel.
· Sukar untuk melihat lubang sampel, tetapi pada masa yang sama, selebihnya mudah. Sekiranya terdapat lubang yang berlebihan, penampan sampel boleh diuji dengan bromophenol biru.
Masa Post: Mar-31-2023